Preparazione standard:
Prepari una norma di riserva mista esattamente pesando (mg ±0.01) circa 10 mg di ogni norma di riferimento di kavalactone in un matraccio tarato 10-mL. Aggiunga 7,0 ml di metanolo e sonichi fino al dissolto a. Diluisca a volume con metanolo e mescoli.
Avviso: Alternativamente, prepari una norma delle azione del kavain in modo simile ed usi i fattori di risposta di kavalactone per quantificare contro.
Diluisca la norma delle azione per creare un minimo di una curva standard quattro punti. Le diluizioni standard suggerite delle azione sono 1:10, 1:25 e 1:100 facendo uso di metanolo.
Avviso: Immagazzini le norme alle temperature refrigerate (0 - 5°C). Kavalactones si degrada rapidamente dopo 48 ore. La preparazione delle norme di riferimento fresche prima di ogni analisi è raccomandata.
Apparato
· Equilibrio analitico calibrato accurato al mg ±0.01
· Boccetta, volumetrica, classe A, dimensioni assortite
· Fiale, cromatografia con il cappuccio
· Sistema di cromatografia liquida a alta pressione come descritto nel capitolo di USP. Verifichi e documenti quell'apparato, software ed i sottosistemi soddisfanno i requisiti prestazionali per la qualificazione dell'installazione/qualificazione dell'operazione (IQ/OQ).
· Filtri, 0,45 µm, il nylon di Gelman Acrodisc (P/N 4426), il polipropilene di Whatman Puradisc™ (gatto. No. 6788-2504), vetro di Whatman GD/X (gatto. No. 6894-2504) o Sonicator equivalente
· Colonna, YMCbasic, 5 µm, 4,6 x 250 millimetri (gatto. No BA99S05-2546WT). Colonna equivalente, YMC J'Sphere H80, 4µ, 4,6 x 250 (gatto. No JH08S04-2546WT).
Reagenti
· Acqua, grado di HPLC o Nanopure
· Metanolo, grado di HPLC
· Acetonitrile, grado di HPLC
· Acido fosforico, grado del reagente di ACS
Preparazione del campione:
Materia vegetale
Pesi esattamente (± 0.1mg) circa 750 mg di gambo, di sbucciatura, o di materiale macinata finemente della radice.
Disponga il materiale in un matraccio tarato 50-mL con 40 ml di metanolo/acqua (70/30). Sonichi per 60 minuti alla temperatura ambiente.
Permetta che la boccetta si raffreddi alla temperatura ambiente e si diluisca a volume con metanolo/acqua (70/30) e si mescoli.
Campione del posto e del filtro in una fiala ed in un cappuccio di HPLC.
Polvere ed estratto molle (pasta)
Pesi esattamente (mg del ± 0,1) circa 100 mg di estratto in un matraccio tarato 50-mL. (I 100 pesi di mg sono basati sopra un contenuto di kavalactone 50-60% nell'estratto.) Avviso: Omogeneizzi con attenzione l'estratto prima della campionatura. Compire ciò disponendo l'estratto in un contenitore immerso in un 60° - bagno d'acqua caldo di 80° C fino a a flusso libero.
Aggiunga 40 ml di metanolo e sonichi per 10 minuti o fino a tutti solidi si sono dissolti.
Permetta che la boccetta si raffreddi alla temperatura ambiente e si diluisca a volume con metanolo e si mescoli.
Campione del posto e del filtro in una fiala ed in un cappuccio di HPLC.
Campioni della polvere
L'estratto di kava-kava è mescolato spesso o seccato a spruzzo sui vari trasportatori. Per analizzare con successo i campioni della polvere, è necessario da sviluppare un punto della preparazione del campione che recupera i kavalactones dal trasportatore. Ciò può essere compiuta in primo luogo estraendo con il metanolo o acqua puro.
Circostanze cromatografiche:
Colonna: YMCbasic, 5 µm, 4,6 x 250 millimetri
Temperatura della colonna: 40°C
Portata: 0,6 ml/min per YMCbasic; ml/min 1,0 per J'Sphere
Fase mobile: 0,1% acidi fosforici isocratic: alcool di isopropile: acetonitrile (64:16: 20 v/v)
Rilevazione: 220 nanometro (246 nanometro alternativamente per migliorare selettività)
Volume dell'iniezione: µL 5
Tempo di esecuzione: 30 minuti
Procedura:
Prepari le soluzioni tipo di riferimento e provi le preparazioni come dirette.
Faccia una singola iniezione di uno spazio in bianco del solvente di estrazione.
Faccia la singola iniezione delle preparazioni standard.
Crei un diagramma di linearità delle aree di picco standard contro le concentrazioni standard.
Faccia le singole iniezioni delle preparazioni del campione.
Calcoli la concentrazione di kavalactone nel campione.
Idoneità del sistema:
Il coefficiente di correlazione della regressione lineare deve essere ≥0.999. La risoluzione fra desmethoxyyangonin ed i picchi del yangonin deve essere ≥1.8.
Biotecnologia Co., srl dell'Y-erba di Shaanxi.